Brilliant Black Reduction Test (BRT)

BRT Inhibitor Test проводится следующим образом:

·         Удалите  запаянную фольгу с тестовой пластины.

·         Внесите пипеткой 0,1 мл тестируемого образца молока в одну ячейку (рекомендуется делать в двух повторностях)

·         Внесите пипеткой 0.1 мл Контрольного образца молока без антибиотиков (Negative Milk Control, Inhibitor free Milk) в одну ячейку

·         Внесите пипеткой 0.1 мл Контрольного образца молока с антибиотиком (Positive Milk Control, Penicillin G Standard) в одну ячейку

·         Запечатайте тестовую пластину самоклеящейся лентой

·         Инкубируйте тестовую пластину на водяной бане или в твердотелом термостате при 65°С до тех пор пока агар с Контрольным образцом молока без антибиотиков не станет желтым (2ч 15 мин ± 15 мин)

·         Молоко может затем быть вылито перед оценкой

·         Результат теста оценивается со дна тестовой пластины

Проведение теста одинаково для комплектаций Single (tubes) и Strips. Tест является стандартизованным, и каждая партия анализируется в соответствии с условиями проведения, описанными выше. В случае, если процедура проведена неправильно, нет гарантий точности результатов.

BRT Inhibitor Test производится в соответствии с Заключением Комиссии 91/180/ЕЭС и Закона о продуктах питания и пищевых добавках Германии LFGB, параграф 64 (ранее Закона о продуктах питания и потребительских товарах LMBG, параграф 35) метод L 01.01-5.

Важная информация по использованию теста

Хранение и сроки годности

Brilliant Black Reduction Test (BRT Inhibitor Test) должен храниться в прохладном месте. В этих условиях BRT тест годен к использованию в течение не менее 3 месяцев (BRT ESL 6 месяцев, BRT tubes 9 месяцев). После периода хранения время инкубирования может увеличиться (на приблизительно 15-30 мин, в зависимости от длительности хранения). Тем не менее, чувствительность теста (пределы определения) не зависит от длительности хранения.

Тестируемые образцы молока

Тестируемые образцы молока должны быть хорошего качества и тестироваться как можно быстрее. Для кратковременного хранения температура 6-10°С достаточна. Для более длительного хранения образцы должны быть заморожены чтобы предотвратить инактивацию каких-либо ингибиторов. Образцы, замороженные таким образом, должны подвергаться оттаиванию на водяной бане при 45°С, и должны тщательно перемешиваться перед тестированием.

Контрольные образцы/стандарты

Контрольные образцы молока без антибиотиков и с антибиотиками должны всегда быть в комплекте и тестироваться тем же самым образом, как и тестируемые образцы молока. Таким образом принимается в расчет влияние тестовых образцов молока на тест-систему.

Контрольный образец молока без антибиотиков (Inhibitor Free Milk) используется в BRT тесте в качестве отрицательного контрольного образца. Контрольный образец молока без антибиотиков поставляется в лиофилизированной форме и может быть внесен пипеткой после восстановления в тестовые ячейки. Ячейка, содержащая Контрольный образец молока без антибиотиков, должна изменить цвет с голубого на желтый в течение инкубации.

Контрольный образец молока с антибиотиком Penicillin G (Penicillin G Standard) служит как положительный контроль. Контрольный образец молока с антибиотиком Penicillin G должен быть соответствующим образом растворен согласно инструкции по использованию и затем может быть внесен пипеткой в одну из ячеек теста BRT. Ячейка, содержащая Контрольный образец молока с антибиотиком Penicillin G, должна остаться голубой после инкубации.

Раствор пенициллиназы (Penicillinase solution) может использоваться для идентификации нестабильных к пенициллиназе пенициллинов. Раствор пенициллиназы поставляется готовым к использованию и может быть использован следующим образом:

Отмерьте пипеткой 10 мкл в одну из ячеек. Добавьте 0.1 мл контрольного образца молока с антибиотиками и инкубируйте описанным способом. Если образцы молока были загрязнены пенициллинами, нестабильными к пенициллиназе, ячейки будут показывать отрицательный результат после инкубации. В присутствиии других ингибиторов, будет видна положительная реакция.

В случае контаминации растворов или Контрольного образца молока без антибиотиков они могут быть не пригодны к использованию или приводить к некорректным результатам. Контроли вследствие этого должны всегда сохраняться чистыми и использоваться аккуратно.

Герметизация тестовых контейнеров

Тестовые пластины (strips, tubes) должны быть запаяны с особенной тщательностью перед тем как поместить их на водяную баню. Если вода проникнет внутрь, результат теста может быть некорректным.

Инкубирование

Инкубирование может осуществляться на водяной бане, в твердотелом термостате или в инкубационной камере. Водяная баня или твердотелый термостат являются  наиболее предпочтительными, в этом случае идет непосредственный нагрев пробирок (ячеек) и более равномерное распределение тепла. Во всех этих способах важно, чтобы температура оставалась постоянной и не было значительной разницы температур как по времени, так и по площади нагрева.

Температура инкубирования

Температура инкубирования для водяной бани и для твердотелого термостата 65°С. В инкубационной камере температура может быть установлена индивидуально в зависимости от типа оборудования, и может быть в пределах 65-69°С. Рекомендуется использование водяной бани или твердотелого термостата из-за более легкого и надежного регулирования температуры. Если инкубационная температура отклоняется от идеальных 65°С (измеренная внутри тестовой системы), время инкубирования будет возрастать значительно (до 30 мин или более).

Время инкубирования

Время инкубирования зависит от установленной температуры и постоянства равномерного распределения нагрева. В идеальных условиях время инкубирования составляет 2 ч ± 15 мин. Время инкубирования может, однако, возрастать в результате воздействия факторов, таких как различное время хранения. Инкубирование теста должно проводиться до тех пор пока Контрольный образец молока без антибиотиков не изменит свой цвет полностью.

Оценка результатов

Корректная оценка результатов может быть сделана только в том случае, если по крайней мере один положительный и один отрицательный контрольный образец были включены в тестирование, и оба прореагировали надлежащим образом.

Интерпретация результатов теста должна быть в соответствии с официальными законами; эти законы могут отличаться в разных странах.

По оценке результатов – см. Инструкцию по использованию в картинках.

В Германии согласно законам существуют две возможных интерпретации результатов:

Проведение тестов для оценки стоимостного выражения качества молока (тест в соответствии с официальным регистрированием проведенной процедуры теста согласно параграфа 64 LFGB (ранее параграф 35 LMBG) Метод L 01.01-5) должно быть оценено следующим образом:

·         Все комплектации теста BRT, которые показали по крайней мере интенсивность цвета Контрольного образца молока с антибиотиками (Penicillin G Standard), должны быть оценены как положительные.

Проверка тестов, проведенная в соответствии с германским Законом о пищевых добавках (MRL screening test в соответствии с официальным регистрированием оценки процедуры теста согласно параграфа 64 LFGB (ранее параграф 35 LMBG) Метод L 01.00-11) должно быть оценено следующим образом:

·         Все комплектации теста BRT, которые показали цвет, который явно отличается от цвета Контрольного образца молока без антибиотиков, должны быть оценены как положительные или сомнительные.